1、MTT法原理和步骤 原理 MTT法，即甲基四唑溴化物法，常用于细胞毒性实验和增殖检测。其原理在于活细胞中的线粒体脱氢酶能将黄色的MTT还原成蓝紫色的甲瓒，沉积在细胞中。通过检测甲瓒的量，可以反映细胞的活性。活细胞越多，代谢越旺盛，还原出来的甲瓒就越多。
2、MTT法实验步骤如下：首先，收集对数期细胞，调整浓度至1000-10000个细胞/孔，用100ul细胞悬液铺板于96孔平底板上，边缘孔用无菌PBS填充。细胞在5% CO2和37℃的环境下孵育，直至形成单层细胞。
3、检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
1、方圆圆（站内联系TA）实验应该同时做阳性对照和阴性对照，阳性对照是肯定有抗肿瘤活性的物质sunjie216216（站内联系TA）我做MTT实验的阳性对照用的是顺铂，以前也用过紫杉醇，但太贵了，后面就不用了。
2、一般除了处理组外，需要设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），因为是用吸光值检测的，一般不需要阳性对照。
3、避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
MTT法实验步骤如下：首先，收集对数期细胞，调整浓度至1000-10000个细胞/孔，用100ul细胞悬液铺板于96孔平底板上，边缘孔用无菌PBS填充。细胞在5% CO2和37℃的环境下孵育，直至形成单层细胞。
细胞培养与处理：将细胞培养在适当的条件下，根据实验需求进行药物处理或其他实验操作。 添加MTT溶液：在细胞处理完毕后，加入一定量的MTT溶液。让细胞在含有MTT的培养环境中继续培养一段时间。这段时间内，活细胞会将MTT还原成甲瓒。
药物MTT法实验步骤：贴壁细胞： 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔，每次加入细胞的枪头贴着96孔的四周，旋转缓慢加入，加入细胞后可前后左右水平摇晃几下，以让细胞铺板更佳。
实验步骤DAY 1： 离心并计数处于对数期生长的细胞。 在96孔板中均匀接种细胞，培养24小时。 DAY 2： 选择生长良好的细胞，配置不同浓度的样本溶液，培养后观察。 DAY 3/4： 解冻并离心MTT试剂，配置0.5mg/mL溶液。 加入MTT溶液，4小时后去除上清，溶解甲臜，测量570nm的吸光度。
对于悬浮细胞，处理方法略有不同。首先，调整细胞悬液浓度，加入Actinomycin D和检测物后，以100微升细胞悬液（5×104个/孔）加入96孔板，然后进行孵育和MTT添加。悬浮细胞推荐使用WST-1替代MTT，测量吸光值时需在OD570nm处。实验结束后，同样进行结晶溶解和吸光值测量，设置对照孔并考虑复孔设置。
1、ZL不要听一楼说的，我们实验室条件在国内绝对是一流的，细胞毒性有的时候还是用的MTT法，方法这东西只有适合不适合，没有垃圾不垃圾，数据能反应问题就可以了，我们用两篇CAS nano 有的都是MTT法。我既然你的实验需要考察挥发性溶剂的IC 50，不妨尝试下隔断时间将有机溶剂补回去。
2、三萜：这就是人参有效成分的皂苷，具有多方面的生物活性。换句话说，蜂胶液有人燊的一些主要作用。蜂胶中含有丰富的矿物质和微量元素。
实验步骤DAY 1： 离心并计数处于对数期生长的细胞。 在96孔板中均匀接种细胞，培养24小时。 DAY 2： 选择生长良好的细胞，配置不同浓度的样本溶液，培养后观察。 DAY 3/4： 解冻并离心MTT试剂，配置0.5mg/mL溶液。 加入MTT溶液，4小时后去除上清，溶解甲臜，测量570nm的吸光度。
操作指南与样本处理无论是组织、细菌细胞还是液体样本，处理步骤都需要根据预实验调整。以下是关键步骤的示例：组织样本：取0.1g组织，用提取液A处理，离心并提取上清液，加入提取液B后再次离心，取上清待测。细菌或细胞：收集一定数量的细胞，使用超声破碎处理，离心后提取上清液，同样与提取液B混合，待测。
实验结果的统计处理需根据具体实验要求来确定。你可以选择使用吸光度（OD）值、细胞存活率或细胞抑制率等作为统计指标。 在查阅相关文献时，你会注意到这些指标在文献中均有应用。你可以参考这些文献来选择最适合你实验的数据表达方式。 绘制实验曲线并不复杂，可以使用EXCEL或SPSS等软件工具来完成。
要计算细胞抑制率，用1减去所得到的增殖率即可。
⒍理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。⒎实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。⒏避免血清干扰。
细胞培养与处理：将细胞培养在适当的条件下，根据实验需求进行药物处理或其他实验操作。 添加MTT溶液：在细胞处理完毕后，加入一定量的MTT溶液。让细胞在含有MTT的培养环境中继续培养一段时间。这段时间内，活细胞会将MTT还原成甲瓒。
